無菌操作原則：
1、環(huán)境要清潔，進行無菌操作前半小時，須停止清掃地面等工作。避免不必要的人群流動，防止塵埃飛揚。治療室應每天用紫外線消毒一次。
2、在執(zhí)行無菌操作時，必須明確物品的無菌區(qū)和非無菌區(qū)。
3、執(zhí)行無菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并將手擦干，注意空氣和環(huán)境清潔。
4、夾取無菌物品，必須使用無菌持物鉗。
四、進行無菌操作時，凡未經消毒的手、臂、均不可直接接觸無菌物品或超過無菌區(qū)取物。
5、無菌物品必須保存在無菌包或滅菌容器內，不可暴露在空氣中過久。無菌物與非無菌物應分別放置。無菌包一經打開即不能視為絕對無菌，應盡早使用。凡已取出的無菌物品雖未使用也不可再放回無菌容器內。
6、無菌包應按消毒日期順序放置在固定的柜櫥內，并保持清潔干燥，與非滅菌包分開放置，并經常檢查無菌包或容器是否過期，其中用物是否適量。
7、無菌鹽水及酒精、新潔爾滅棉球罐每周消毒一次，容器內敷料如干棉球、紗布塊等，不可裝得過滿，以免取用時碰在容器外面被污染。
無菌操作無菌操作技術及注意事項
1、玻璃器皿的消毒和清潔
⑴新購玻璃器皿的處理
新購玻璃器皿應用熱肥皂水洗刷，流水沖洗，再用1%～2%鹽酸溶液浸泡，以除去游離堿，再用水沖洗。對容量較大的器皿如試劑瓶、燒瓶或量具等，經清水洗凈后應注入濃鹽酸少許，慢慢轉動，使鹽酸布滿容器內壁數(shù)分鐘后傾出鹽酸，再用水沖洗。
⑵污染玻璃器皿的處理
①一般試管或容器可用3%煤酚皂溶液或5%石炭酸浸泡，再煮沸30分鐘，或在3%～5%漂白粉澄清液內4小時，有的亦可用肥皂或合成洗滌劑洗刷使盡量產生泡沫，然后用清水沖洗至無肥皂為止。最后用少量蒸餾水沖洗。
②細菌培養(yǎng)用的試管和培養(yǎng)皿可先行集中，用1kg/cm2高壓滅菌15～30分鐘，再用熱水洗滌后，用肥皂洗刷，流水沖洗。
③吸管使用后應集中于3%煤酚皂溶液中浸泡24小時，逐支用流水反復沖洗，再用蒸餾水沖洗。
④油蠟沾污的器皿，應單獨滅菌洗滌，先將沾有油污的物質棄去，倒置于吸水紙上，100℃烘干半小時，再用堿水煮沸，肥皂洗滌，流水沖洗。必要時可用***或汽油去油污。
⑤染料沾污的器皿，可先用水沖洗，后用清潔或稀鹽酸洗脫染料，再用清水沖洗。一般染色劑呈堿性，所以不宜用肥皂的堿水洗滌。
⑥玻片可置于3%煤酚皂溶液中浸泡，取出后流水沖洗，再用肥皂或弱堿性煮沸，自然冷卻后，流水沖洗。被結核桿菌污染或不易洗凈的玻片，可置于清潔液內浸泡后再沖洗。
2、無菌器材和液體的準備
將玻璃器具中的培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶、試管、吸管等按上述方法洗凈烘干后，用一潔凈紙包好瓶口并把吸管尾端塞上棉花，裝入干凈的鋁盒或鐵盒中，于120℃的干燥箱中干燥滅菌2小時，取出備用。對于手術器械、瓶塞、工作服以及新配制的PBS洗液，則采用高壓蒸氣滅菌法，即在15磅的條件下，加熱20分鐘。而對于MEM培養(yǎng)液、小牛血清和消化液等需用G5或G6濾器負壓抽濾后使用。
3、無菌操作過程在無菌操作過程中，最重要的是要保持工作區(qū)的無菌、清潔。因此，在操作前20～30分鐘要先啟動超凈臺和紫外燈，并認真洗手和消毒。在操作時，嚴禁喧嘩，嚴禁用手直接拿無菌物品，如瓶塞等，而必須用消毒的止血鉗、鑷子等。培養(yǎng)瓶應在超凈臺內操作，并且在開啟和加蓋瓶塞時需反復用酒精燈燒。對于吸管應先用手拿后1/3處，戴上膠皮乳頭，并用酒精燈燒烤之后再吸液體。
4、常用清潔液的配制法
⑴重鉻酸鉀清潔液：可根據(jù)不同需要，選用下列的任何一種濃度。先將重鉻酸鉀溶于水中，再慢慢加入濃硫酸。注意，此時可產生高熱，應防止容器破裂。重鉻酸鉀清潔液除污力強，腐蝕性大，應避免接觸皮膚和衣服。為防止吸收空氣的水分而變質，此液應貯存于帶蓋的容器中。如清潔效力較差，可再加入少量重鉻酸鉀及濃硫酸，還可繼續(xù)使用。直到液體變藍綠色，即不能再用。配制重鉻酸鉀清潔液時，宜用耐高溫的陶瓷缸或耐酸搪瓷或塑料容器。使用玻璃器皿時，應特別注意防止產生高熱而破裂，切忌用量筒來配制。
⑵磷酸三鈉將其配成5%～10%水溶液，可用于洗滌玻璃器皿上的油污，但經常使用腐蝕玻璃，使器皿表面模糊、毛糙。
⑶硝酸清潔液將其配成50%水溶液，可用于清潔微量滴定筒。⑷
乙二胺四乙酸二鈉（EDTA鈉鹽）將其配成5%～10%水溶液，可洗脫粘附于玻璃器皿內壁的白色沉淀物。⑸尿素溶液尿素是溶解蛋白質的良好溶劑，適用于洗滌粘附有血液血清等蛋白質的吸管、試管等。
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